pcr对照组一般设为1吗(pcr对照组一般设为1吗)

pcr对照组一般设为1吗， 第一章基因工程

第一节基因工程概述

一.基因工程的概念

操作环境

操作对象

操作级别

基本过程

结果

在试管内

基因

分子水平

剪切拼接引入表达

人类需要的基因产品

因为基因工程是在DNA分子水平上操作的，所以也被称为重组DNA技术。

二。基因工程的基本工具

(一)“分子手术刀”——限制性核酸内切酶(以下简称限制性内切酶)

1.来源：主要从原核生物中分离纯化。

2.功能：能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并在每条链上制造两个特定部分

核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。

3.结果：限制性内切酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：粘端和平端。

（二）“分子针线”——DNA连接酶

1分类：根据酶的来源不同，可分为EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类

2功能：恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

两种DNA连接酶(EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较：

相同点：都缝合磷酸二酯键

区别：EcoIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接；

T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。

DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较

DNA连接酶

DNA聚合酶

不同点

连接的DNA

双链

单链

模板

不要模板

要模板

连接的对象

2个DNA片段

单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上

相同点

作用实质

形成磷酸二酯键

化学本质

蛋白质

(三) “分子运输车”——载体

1.载体具备的条件：

能在受体细胞中复制并稳定保存；

具有一至多个限制酶切割位点，供外源DNA片段插入；

具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

2.基因工程常用的载体有： 质粒、 噬菌体和动、植物病毒等。

最早应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。

三基因工程的基本过程

(一) 获得目的基因（目的基因的获取）

1.获取方法主要有两种：从自然界中已有的物种中分离出来，可从基因文库中获取。

用人工的方法合成。

获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。

人工合成基因的常用方法有反转录法和化学合成法。

2.利用PCR技术扩增目的基因

（1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

（2）目的：获取大量的目的基因

（3）原理：DNA双链复制

（4）过程：第一步：加热至9095DNA解链为单链；

第二步：冷却到5560，引物与两条单链DNA结合；

第三步：加热至7075，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。

（5）特点：指数形式扩增

(二) 制备重组DNA分子（基因表达载体的构建）

1重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有标记基因。

标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。

2方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。

(三) 转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞）

1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

2.常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌介导转化技术（农杆菌转化法），其次还有基因枪介导转化技术（基因枪法）和花粉管通道技术（花粉管通道法）。

将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。

将目的基因导入微生物细胞：Ca处理法。

(四) 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达（目的基因的检测与鉴定）

1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。

2.其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是采用DNA分子杂交技术。

3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是采用抗原—抗体杂交技术。

4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如抗虫或抗病的鉴定等。

第二节基因工程的应用

1运用基因工程改良动植物品种最突出的优点是：能打破常规育种难以突破的物种之间的界限。

2基因工程的应用

（1）植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。

（2）动物基因工程：提高动物生长速度来提高产品产量、改善产品品质，用转基因动物生产药物，用转基因动物作器官移植的供体等。

（3）基因诊断和基因治疗：

基因诊断：又称为DNA诊断，是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病

原体。

基因治疗：指利用正常基因置换或弥补缺陷基因的治疗方法。

实例：ADA基因缺陷症的基因治疗

第三节蛋白质工程

1蛋白质工程的实质：根据蛋白质的结构与功能之间的关系，通过改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的、具有优良特性的蛋白质。

2蛋白质工程的基本原理

预期蛋白质功能测定蛋白质三维空间结构推测应有的氨基酸序列找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）具有预期功能的蛋白质

3.蛋白质工程的应用

（1）通过改造酶的结构，有目的地提高蛋白质的热稳定性。

（2）合成嵌合抗体。

（3）改变蛋白质的活性。

蛋白质工程与基因工程区别

蛋白质工程

基因工程

实质

通过改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的蛋白质

将目的基因从供体转移到受体细胞，并在受体细胞中表达

结果

合成自然界不存在的蛋白质

只能生产自然界已存在的蛋白质

联系

蛋白质工程是在基因工程基础上，延伸出的第二代基因工程

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